您好,現(xiàn)在漢格來為大家解答以上的問題。elisa實驗原理及注意事項，elisa的原理和實驗步驟相信很多小伙伴還不知道,現(xiàn)在讓我們一起來看看吧！

1、1. ELISA的原理ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。

2、結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。

3、在測定時，受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。

4、用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。

5、再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。

6、此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。

7、加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。

8、由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測定方法達到很高的敏感度。

9、操作步驟:1．從已平衡至室溫的密封袋中取出試驗所需板條，未用的板條和干燥劑請放回鋁箔袋內(nèi)壓 實自封條，密封口袋，放回4℃。

10、2．空白孔加標準品和標本稀釋液，其余相應(yīng)孔中加標本或不同濃度標準品(100ul/孔)，用封板膠紙封住反應(yīng)孔，36℃孵箱孵育90分鐘。

11、3．提前20分鐘準備生物素化抗體工作液。

12、4．洗板5次。

13、5．空白孔加生物素化抗體稀釋液，其余孔加入生物素化抗體工作液(100ul/孔)。

14、用新封板膠紙封住反應(yīng)孔，36℃孵箱孵育60分鐘。

15、6．提前20分鐘準備酶結(jié)合物工作液。

16、避光室溫(22-25 ) ℃ 放置。

17、7．洗板5次。

18、8．空白孔加酶結(jié)合物稀釋液，其余孔加入酶結(jié)合物工作液(100ul/孔)。

19、用新封板膠紙封住反應(yīng)孔，36℃孵箱，避光孵育30分鐘。

20、9．打開酶標儀電源，預(yù)熱儀器，設(shè)置好檢測程序。

21、10．洗板5次。

22、11．加入顯色底物(TMB)100ul/孔，避光36℃孵箱，避光孵育15分鐘。

23、12．加入終止液100ul/孔, 混勻后即刻測量OD450值(3分鐘內(nèi))。

24、在儀器保存讀數(shù)結(jié)果并打印一份紙質(zhì)結(jié)果。

25、13．實驗完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回電冰箱保存至有效期結(jié)束。

26、建議保存酶標板框，以備下次或者今后試驗使用。

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